白介素27ELISA試劑盒是一種用于定量檢測(cè)樣本中IL-27濃度的試劑盒,基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)。其原理是將特異性抗體包被在微孔板(或酶標(biāo)板)上,加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣本,樣本中的IL-27會(huì)與包被抗體結(jié)合。然后加入生物素化抗體,該抗體會(huì)與已結(jié)合的IL-27發(fā)生特異性結(jié)合。接著加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素,生物素與鏈霉親和素會(huì)發(fā)生高強(qiáng)度的非共價(jià)結(jié)合。最后加入顯色劑底物TMB,若反應(yīng)孔中存在IL-27,則HRP會(huì)使無色TMB變成藍(lán)色物質(zhì),加入終止液后反應(yīng)孔會(huì)變成黃色。在特定波長下測(cè)定反應(yīng)孔的吸光度(OD值),樣本中的IL-27濃度與OD值成正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出樣本中IL-27的濃度。
一、溫度控制
核心組分:如標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A/B、96孔板等,需立即保存于-20℃或更低的溫度下,以防止蛋白質(zhì)變性或降解。
其他試劑:如洗滌液、終止液等,建議保存在4℃的冰箱中,避免冷凍。
特殊說明:嚴(yán)禁冷凍含甘油或酶標(biāo)抗體的組分,這可能導(dǎo)致蛋白變性,影響試劑性能。
二、避光防潮
避光保存:所有試劑需避光保存,尤其是HRP標(biāo)記物和TMB底物。這些試劑對(duì)光敏感,長時(shí)間暴露于光線下可能導(dǎo)致其活性降低或失效。建議使用鋁箔包裹或棕色瓶存放。
防潮處理:確保試劑容器密封良好,防止?jié)駳膺M(jìn)入。濕氣可能導(dǎo)致試劑降解和損壞,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在南方高濕地區(qū),建議在試劑盒保存罐內(nèi)放置變色硅膠干燥劑,當(dāng)指示劑由藍(lán)變粉時(shí)需立即更換。
三、特殊成分特殊保存
標(biāo)準(zhǔn)品:部分標(biāo)準(zhǔn)品可能需要避光或在-20℃以下保存,應(yīng)嚴(yán)格按說明書要求操作。
分裝保存:對(duì)于頻繁使用的試劑盒,建議將酶標(biāo)物按單次用量分裝至0.5mL離心管中,使用封口膜密封管口后置于-20℃避光保存。分裝前需對(duì)工作臺(tái)進(jìn)行紫外線消毒,操作全程佩戴低溫防護(hù)手套,避免反復(fù)凍融導(dǎo)致蛋白聚合。
四、確保包裝完整
保存前要確認(rèn)試劑盒包裝完好無損,若包裝有破損、密封不嚴(yán),應(yīng)及時(shí)更換包裝或采取密封措施,防止試劑污染或變質(zhì)。
五、使用前準(zhǔn)備
回溫處理:實(shí)驗(yàn)前,將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出,在室溫下平衡15-30分鐘后再使用。這有助于確保試劑溫度與室溫一致,避免因溫度差異影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
梯度解凍:對(duì)于冷凍保存的試劑,應(yīng)采用梯度解凍的方法。例如,將分裝管置于4℃冰箱梯度解凍12小時(shí),禁止室溫快速解凍。解凍后的酶標(biāo)物需在24小時(shí)內(nèi)使用完畢,未用完部分應(yīng)當(dāng)廢棄。
